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產(chǎn)品說明：

產(chǎn)品描述

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。

主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO；后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。  

使用方法

1. 體外生物發(fā)光檢測

1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30 mg/mL的儲存液 (100-200×) ，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至0.15-0.3 mg/mL的工作液濃度。

3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10 min，然后進(jìn)行圖像分析。

2. 活體成像分析

1）用無菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。

2）用0.2 μm濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

3）腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射。

4）注射入體內(nèi)10-15 min（待光信號達(dá)到最強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定最高信號檢測時(shí)間和信號平臺期。

注意事項(xiàng)：

1）本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）僅僅是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylic acid。

2）注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動力學(xué)曲線，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時(shí)間。

3）如果要進(jìn)行ATP的檢測，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水。

4）本品要進(jìn)行避光操作和保存。儲存液過濾除菌后可分裝于-20℃或-80℃凍存。如果有條件，可對儲存液充入氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸€(wěn)定性和保存時(shí)間長達(dá)1年。

5）在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時(shí)，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測。

6）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。