訂購信息：
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目錄號 |
產品名稱 |
規格 |
售價 |
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X12064 |
FITC Phalloidin FITC標記鬼筆環肽 |
300T |
￥985.00 |
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X12065 |
FITC Phalloidin (Powder) FITC標記鬼筆環肽 |
1mg |
￥6410.00 |
特性說明：
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分子式 |
C56H60N10O15S2 |
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分子量 |
1177.3 g/mol |
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Ex/Em |
495~496/513~516nm |
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多肽序列 |
FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6) |
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外觀 |
黃色粉末（凍干粉） |
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溶解性 |
溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%） |
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運輸條件 |
冰袋運輸 |
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儲存條件 |
-20°C保存，1年有效期 |
產品描述：
鬼筆環肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin結合，通常用來標記組織切片，細胞培養物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin進行定性和定量分析。另外，鬼筆環肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區域和非染色區域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究。另外鬼筆環肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發生反應；鬼筆環肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。
鬼筆環肽（Phalloidin）的結合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發生的臨界濃度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為FITC標記的鬼筆環肽，染色反應特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外，經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛。
我司分別提供凍干粉形式和儲存液形式的FITC標記鬼筆環肽，用戶根據自身需求選擇。建議使用濃度為80~200nM。
操作說明：
需要自備材料
1）（可選）甲醇
2）1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細胞培養級別
3）固定液4%多聚甲醛（溶于PBS緩沖液）
4）丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
5）Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含DAPI），DAPI
6）（可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含DAPI）
7）（可選）BSA，標準級別
8）載玻片和蓋玻片
9）蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
10）組裝有FITC激發/發射濾片，以及DAPI激發/發射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡。
1. 工作液準備
1）對于FITC標記鬼筆環肽
本品以溶于甲醇的20μM儲存液形式提供，總量為300μl。按照100 nM的工作液濃度來換算，可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩定。
開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現配現用。
2）對于FITC標記鬼筆環肽
本品以凍干粉形式提供，分子量為1177.3，總量為1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100μM的儲存液。如，加入8.494ml甲醇到1mg鬼筆環肽即得到100μM等量的儲存液，根據單次使用量，進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩定。
開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現配現用。
2. 染色步驟
1）細胞爬片生長24h，使其密度達到50%匯合度。
2）吸掉培養液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。
3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定10min。
注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。
4）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。
5）室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。
6）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。
7）取200μl配制好的 FITC標記鬼筆環肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育30min（通常情況下，4℃~37℃孵育皆可）。
注意：為了降低背景，可于FITC標記的鬼筆環肽工作液內加入1% BSA；另外，孵育過程中為了避免溶液揮發，可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。
8）用PBS清洗蓋玻片3次，每次5min。
9）使用200μl DAPI溶液（濃度：100 nM）對細胞核進行復染，約30s。
10）用PBS清洗蓋玻片，然后倒置在已經滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑，然后用指甲油永久封片。此法制備的標本玻片可置于4℃避光保存，通常6個月內可繼續做F-actin染色分析。
注意：也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑合并步驟9）10），簡化步驟。
11）熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇FITC激發/發射濾片（Ex/Em=496/516nm）和DAPI激發/發射濾片（Ex/Em=364/454nm）。
注意事項：
1）鬼筆環肽具有毒性，需小心操作（對人的半數致死劑量LD50約2mg/kg）。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一 次性手套操作。
本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。
