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特性說明：

產品描述：

線性化聚乙烯亞胺PEI 40000 (Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一款優秀和低成本的瞬時性轉染試劑。 在HEK293和CHO表達系統中，PEI在寬廣的生產規模內(從96孔板到100L生物反應器) 能提供連續性的高基因表達。

作為線性化聚Z烯亞胺PEI25000 (PEI 25K)的升級產品，操作更簡單，且具有連續性的更高表達滴度，優勢在于: 1) PEI 25K轉染溶液通常需幾個小時來配置，然而，PEI 40K在2個小時內即可轉化為即用型的溶液; 2) PEI 25K含4-11%殘留的丙酰基基團，該基團阻止聚合物骨架緊密結合到DNA。然而，PEI 40K完全去丙酰化結構，意味著每個批次保持連續性更高轉化效率。

本品是PEI 40K的無菌溶液，濃度為1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用來轉染250μg DNA,或者，6孔板內約做60- 120次轉染。

試劑準備:

稀釋液準備:用細胞培養級水來制備150mM NaCl (比如: 稱取876.6mg高純NaCI加入80ml細胞培養級水，充分溶解后，定容到100ml,經0.1或0.2μm濾膜過濾除菌。)

[注意] :也可使用商業化的無血清培養基(比如Opti-MEM |)來制備轉染復合物。

一、貼壁細胞操作方法

1.1鋪板

a) 轉染前18-24h進行鋪板，調整合適的細胞密度(參考表1)，使其在轉染時細胞密度達60-80%.[注意] :高血清水平會抑制轉染效率，大多數情況，低血清水平(≤5%) 能產生最高的轉染效率。

1.2轉染步驟(以6孔板的單孔為例)

a)轉染前1-2h, 每孔替換為3m|含2%血清的新鮮生長培養基。

b)制備PEI 40K-DNA轉染復合物(嚴格按照順序進行) :①往300μI稀釋液內加入2μg質粒DNA,低速混合/渦旋均勻;②往混合物內加入8μIPEI 40K (1mg/ml) (DNA/PEI 40K=1: 4)， 低速渦旋5s;③無菌環境，室溫靜置20min以形成PEI 40K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次，輕輕混勻。

c)將PEI 40K-DNA轉染復合物轉到孔內。輕輕晃動培養皿或輕微渦旋，使得復合物分散均勻。

[注意] :以上步驟可通過調整PEI 40K-DNA復合物在稀釋液內的體積(稀釋液為培養總體積的10%)來進行放大或縮小(可參考表2)。確保DNA/PEI 40K=1: 4!

1.3孵育
a) 37°C, 5% CO2培養箱內培養細胞，轉染后12-18h,去除含PEI 40K-DNA復臺物的培養液，更換新鮮的生長培養基。

b) 通常，轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀察到最大水平的表達。

二、懸浮細胞操作方法

2.1接種準備

于轉染前2-3h,按照1 .0x 106/ml培養接種細胞。

2.2轉染步驟(以: 50ml培養物/250ml搖瓶為例)

a)制備PEI 40K-DNA轉染復合物(嚴格按照順序進行) :①往2.5ml稀釋液內加入50μg質粒DNA,低速混合/渦旋均勻;②往混合物內加入200μl PEI 40K (1mg/ml) (DNA/PEI 40K=1: 4)，低速渦旋5s;③無菌環境，室溫靜置20min以形成PEI 40K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次，輕輕混勻。

b)將全部轉染溶液加入25ml懸浮細胞內。

c)將懸浮細胞放回培養箱內。

2.3孵育

a)在培養箱內搖動培養2-3h,之后加入25ml新鮮生長培養基。重新放回培養箱。

b)通常,轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀察到最大水平的表達。

注意事項：

1) 請務必使用高質量的無內毒素質粒。通過260 nm光吸收測定DNA濃度, 260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8 ~ 2.0的范圍之內)。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

2)使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。

3)對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞， 在轉染前兩天鋪板可顯著提高重組蛋白的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為60-80%。

4)對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

5)為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。