訂購信息：
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目錄號 |
產品名稱 |
規格 |
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X13143 |
Transfection Reagent 脂質體轉染試劑 |
0.75ml |
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X13144 |
Transfection Reagent 脂質體轉染試劑 |
1.5ml |
特性說明：
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運輸條件 |
冰袋運輸 |
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儲存條件 |
2-8℃保存，1年有效。切勿凍存 |
產品說明：
脂質體轉染試劑(Transfection Reagent)是一款多用途轉染試劑，適用于核酸(DNA、RNA)的轉染，能在絕大多數貼壁和懸浮細胞(哺乳動物細胞系)提供高效轉染。獨特的配方使其能直接加入培養基，血清的存在不會影響轉染效率。轉染后無需去除DNA- 轉染試劑復合物或更換培養基，也可根據自身需求在轉染4-6h后更換新鮮培養基。
本品以無菌液體形式提供，濃度為1mg/ml.通常情況下，對于24孔板的DNA轉染，每次用2μl左右, 則1.5ml轉染試劑約可轉染750個孔;對于24孔板的siRNA轉染，每次用1μl左右， 則1.5ml轉染試劑約可轉染1500個孔;
注意事項：
1）脂質體轉染試劑要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳，這有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響；如果你研究的基因要求比較長的表達時間，比如細胞周期相關基因，或者細胞表面蛋白，最好選擇細胞鋪板密度要求較低的轉染試劑，不適合用脂質體核酸轉染試劑。
2）脂質體轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。另外，要檢測所用的無血清培養基與脂質體核酸轉染試劑的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）轉染的時候培養基中不能添加抗生素。
4）使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率，質粒中的內毒素是轉染的大敵。
5）陽離子脂質體應該在4度保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。
6）初次使用應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3，比如24孔板內接種0.5-2×105個細胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μL 轉染試劑。通過調整DNA/脂質體轉染試劑比例優化轉染效率，保證細胞密度大于90%，DNA（μg）: 轉染試劑比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板為例，其他培養板加樣體積請參考表一）
注：轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優化最佳使用量。
貼壁細胞：轉染前一天（20-24小時），胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板（不含抗生素），使其在轉染時密度為90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
懸浮細胞：轉染當天，配制DNA復合物之前，24孔板中細胞鋪板，每500 μL生長培養基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。
1. 按照以下體系配制DNA-脂質體轉染試劑復合物：
1）對于每孔細胞，使用50 μL無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.5 μg DNA。混勻。
2）對于每孔細胞，使用50 μL無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.6-2.5 μL 脂質體轉染試劑。
脂質體轉染試劑稀釋后室溫孵育5 min（在30 min內同稀釋的DNA 混合，保溫時間過長會降低活性）。
注意：即使脂質體核酸轉染試劑使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用DMEM 培養。如果DMEM 作為脂質體核酸轉染試劑的稀釋液，必須在5 min內同稀釋的DNA混合。
2. 混合稀釋的DNA和稀釋的脂質體核酸轉染試劑（總體積100μL），輕輕混勻，并在室溫（15-25℃）孵育20 min，使得DNA-脂質體復合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染。
注意：DNA-脂質體復合物室溫至少穩定保存5h。
3. 直接將100 μL DNA-轉染試劑復合物加入到細胞培養板每個孔中，搖動培養板，輕輕混勻。
注意：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基，替換為500 μL無血清培養基。
4. 37℃，5% CO2培養箱培養24-48 h，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換培養基。然而，可能有必要在4-6 h后更換生長培養基，不會降低轉染活性。
穩轉細胞株：轉染24 h后，按照1：10或更高比例在細胞中加入新鮮生長培養基，轉染48 h后加入篩選培養基。
懸浮細胞株：在細胞中加入DNA-轉染試劑復合物后，如果需要可以4 h后加入PMA和/或PHA。對于Jurkat細胞，PHA和PMA的終濃度分別為1 μg/mL和50 ng/mL，可以提高CMV啟動子活性和基因表達。對于K562細胞，只加入PMA足以提高啟動子活性。
轉染體系的調整
對于不同的細胞培養板，脂質體轉染試劑、DNA、細胞和培養基的使用量會有所不同，具體請參考下表（表一）。對于96 孔板培養，不需要提前一天進行細胞鋪板，可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達細胞系的高效轉染使得脂質體核酸轉染試劑非常適用于96 孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。
表一：在不同的培養容器中轉染，脂質體核酸轉染試劑，核酸，細胞和培養基的用量
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Culture vessel |
Surf. area per well1 |
Shared reagents |
DNA transfection |
RNAi transfection |
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Vol. of plating medium |
Vol. of dilution medium2 |
DNA |
脂質體核酸轉染試劑 |
RNA |
脂質體核酸轉染試劑 |
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96-well |
0.3 cm2 |
100 μL |
2×25 μL |
0.1 μg |
0.2-0.5 μL |
5 pmol |
0.25 μL |
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24-well |
2 cm2 |
500 μL |
2×50 μL |
0.5 μg |
0.6-2.5 μL |
20 pmol |
1.0 μL |
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12-well |
4 cm2 |
1 mL |
2×100 μL |
1 μg |
2-4.5 μL |
40 pmol |
2.0 μL |
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6-well |
10 cm2 |
2 mL |
2×250 μL |
2-4 μg |
5-10 μL |
100 pmol |
5 μL |
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60-mm |
20 cm2 |
5 mL |
2×0.5 mL |
4-8 μg |
10-20 μL |
200 pmol |
10 μL |
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10-cm |
60 cm2 |
15 mL |
2×1.5 mL |
12-24μg |
30-60 μL |
600 pmol |
30 μL |
1 不同廠商提供的細胞培養板表面積可能有所不同；
2 稀釋DNA或RNAi所用的培養基體積。
注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時DNA（μg）:轉染試劑（μL）比值保持在1:0.5-1:5。
本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。
