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特性說明：

產品說明：

脂質體轉染試劑(Transfection Reagent)是一款多用途轉染試劑，適用于核酸(DNA、RNA)的轉染，能在絕大多數貼壁和懸浮細胞(哺乳動物細胞系)提供高效轉染。獨特的配方使其能直接加入培養基，血清的存在不會影響轉染效率。轉染后無需去除DNA- 轉染試劑復合物或更換培養基，也可根據自身需求在轉染4-6h后更換新鮮培養基。

本品以無菌液體形式提供，濃度為1mg/ml.通常情況下，對于24孔板的DNA轉染，每次用2μl左右, 則1.5ml轉染試劑約可轉染750個孔;對于24孔板的siRNA轉染，每次用1μl左右， 則1.5ml轉染試劑約可轉染1500個孔;

注意事項：

1）脂質體轉染試劑要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳，這有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響；如果你研究的基因要求比較長的表達時間，比如細胞周期相關基因，或者細胞表面蛋白，最好選擇細胞鋪板密度要求較低的轉染試劑，不適合用脂質體核酸轉染試劑。

2）脂質體轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。另外，要檢測所用的無血清培養基與脂質體核酸轉染試劑的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。

3）轉染的時候培養基中不能添加抗生素。

4）使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率，質粒中的內毒素是轉染的大敵。

5）陽離子脂質體應該在4度保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。

6）初次使用應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3，比如24孔板內接種0.5-2×105個細胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μL 轉染試劑。通過調整DNA/脂質體轉染試劑比例優化轉染效率，保證細胞密度大于90%，DNA（μg）: 轉染試劑比值在1：0.5-1：5。

操作流程（以24孔板為例，其他培養板加樣體積請參考表一）

注：轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優化最佳使用量。

貼壁細胞：轉染前一天（20-24小時），胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板（不含抗生素），使其在轉染時密度為90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。

懸浮細胞：轉染當天，配制DNA復合物之前，24孔板中細胞鋪板，每500 μL生長培養基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。

1. 按照以下體系配制DNA-脂質體轉染試劑復合物：

1）對于每孔細胞，使用50 μL無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.5 μg DNA。混勻。

2）對于每孔細胞，使用50 μL無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.6-2.5 μL 脂質體轉染試劑。

脂質體轉染試劑稀釋后室溫孵育5 min（在30 min內同稀釋的DNA 混合，保溫時間過長會降低活性）。

注意：即使脂質體核酸轉染試劑使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用DMEM 培養。如果DMEM 作為脂質體核酸轉染試劑的稀釋液，必須在5 min內同稀釋的DNA混合。

2. 混合稀釋的DNA和稀釋的脂質體核酸轉染試劑（總體積100μL），輕輕混勻，并在室溫（15-25℃）孵育20 min，使得DNA-脂質體復合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染。

注意：DNA-脂質體復合物室溫至少穩定保存5h。

3. 直接將100 μL DNA-轉染試劑復合物加入到細胞培養板每個孔中，搖動培養板，輕輕混勻。

注意：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基，替換為500 μL無血清培養基。

4. 37℃，5% CO2培養箱培養24-48 h，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換培養基。然而，可能有必要在4-6 h后更換生長培養基，不會降低轉染活性。

穩轉細胞株：轉染24 h后，按照1：10或更高比例在細胞中加入新鮮生長培養基，轉染48 h后加入篩選培養基。

懸浮細胞株：在細胞中加入DNA-轉染試劑復合物后，如果需要可以4 h后加入PMA和/或PHA。對于Jurkat細胞，PHA和PMA的終濃度分別為1 μg/mL和50 ng/mL，可以提高CMV啟動子活性和基因表達。對于K562細胞，只加入PMA足以提高啟動子活性。

轉染體系的調整

對于不同的細胞培養板，脂質體轉染試劑、DNA、細胞和培養基的使用量會有所不同，具體請參考下表（表一）。對于96 孔板培養，不需要提前一天進行細胞鋪板，可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達細胞系的高效轉染使得脂質體核酸轉染試劑非常適用于96 孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。

表一：在不同的培養容器中轉染，脂質體核酸轉染試劑，核酸，細胞和培養基的用量

1 不同廠商提供的細胞培養板表面積可能有所不同；

2 稀釋DNA或RNAi所用的培養基體積。

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時DNA（μg）:轉染試劑（μL）比值保持在1:0.5-1:5。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。